外泌體分離的方法有：超離心、過(guò)濾、靜水過(guò)濾透析、切向流過(guò)濾等

下面說(shuō)是常用的過(guò)濾和切向流過(guò)濾區(qū)別：

它使用孔徑為50-450 nm的膜過(guò)濾器從細(xì)胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過(guò)使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標(biāo)尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續(xù)步驟，以及凝膠過(guò)濾和色譜的最后一步。超濾可以通過(guò)切向流過(guò)濾（TFF）或直流過(guò)濾（DFF）方法進(jìn)行處理。DFF方法也稱為死端過(guò)濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問(wèn)題。此外，DFF僅適用于小體積樣品，例如高達(dá)30 mL的樣品。

TFF也稱為錯(cuò)流過(guò)濾是一種更快速、高效和方便的分離大規(guī)模外泌體體積的過(guò)程，TFF是樣品流體切向流過(guò)濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過(guò)程。簡(jiǎn)而言之，樣品通過(guò)0.2μm聚醚砜（PES）膜過(guò)濾，較大的顆粒物質(zhì)（如細(xì)胞碎片和凋亡體）被滯留出來(lái)。然后，包括外泌體在內(nèi)的半處理濾液樣品通過(guò)TFF系統(tǒng)通過(guò)500 kDa截止濾芯進(jìn)行超濾過(guò)程，進(jìn)料流速為120 mL/min，跨膜壓力<3.5 psi跨膜壓力>10:1，外泌體太大而無(wú)法通過(guò)毛孔并保持保留。相反，包括游離蛋白在內(nèi)的小分子通過(guò)中空纖維孔并作為滲透物洗脫并最終從過(guò)程中丟棄。為了獲得高質(zhì)量的外泌體分離和純化，通過(guò)TFF連續(xù)重新濃縮截留物樣品，并去除小于500 kDa的污染物。最后，將純化的外泌體重懸并儲(chǔ)存在-80°C的聚對(duì)苯二甲酸乙二醇（PETG）瓶中的0.1M蔗糖中，并用于所需的分析。通常，通過(guò)結(jié)合超濾加超速離心或離心加超濾等不同分離方法可以成功分離外泌體，使用較低孔徑的膜過(guò)濾和超速離心可提供純外泌體。

所以一般會(huì)選擇TFF切向流過(guò)濾系統(tǒng)

                                                    切向過(guò)濾系統(tǒng)Tanfil100

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